Stát se komunou Schizophyllum: Vytvořte sterilní kulturu z nalezených hub: 3 kroky (s obrázky)

2024 Autor: John Day | [email protected]. Naposledy změněno: 2024-01-30 08:23

Tento návod je zaměřen na vysvětlení, jak vytvořit sterilní kulturu houby Schizophyllum Commune (obecný název houba Split Gill) na Petriho misce pomocí nalezených hub. Bylo zjištěno, že obec Schizophyllum má více než 28 000 pohlaví, lze ji nalézt na všech kontinentech kromě Antarktidy a má schopnost (jako ostatní „houby bílé a hnědé hniloby“) degradovat znečištění narušující endokrinní systém (plasty, průmyslové petrochemické látky napodobující hormony jako hnojivo Atrazin, změkčovadlo Bisphenol-A nebo syntetický hormon Diethylstilbestrol).

Projdu techniky identifikace divokých hub, jak vyrobit Petriho misku s živným agarem a jak použít nalezené houby k pěstování sterilní izolované kultury ve vaší Petriho misce. Další instruktážní materiály v této sérii se zabývají technikami, jako je genetická identifikace hub, jednoduché enzymatické testy k testování schopnosti hub rozkládat plasty a znečištění napodobující hormony a jak vyrábět sýr pomocí S. Commune.

Tento projekt vzešel ze společné práce Mary Maggic, Pauly Pin a mě během pobytu na HANGAR v Barceloně ve Španělsku na podzim 2018. Další informace o projektu si přečtěte na ~~ nebo přeskočte všechny Bla Bla a přejděte rovnou na krok 1 za tutoriál:)

Obrázky jsou ze souborů Schizophyllum Commune Fanzine ~ soubory si můžete zdarma stáhnout zde

Během pobytu jsme měli tři hlavní cíle:

1 ~ Výzkum a trávení vědecké literatury o Schizophyllum Commune a jejích různých interakcích s hormony a endokrinně narušujícími petrochemickými polutanty. S. Commune je jednou z mnoha hub „bílé a hnědé hniloby“, které mají schopnost odbourávat znečištění narušující hormonální a endokrinní systém. Tyto houby se živí stromy vylučováním „lignocelulózových“enzymů z jejich síťovaných těl nebo „mycelií“a enzymy jsou schopné rozložit celulózu a lignin, ze kterých jsou stromy vyrobeny. Kvůli strukturálním podobnostem mezi celulózou, ligninem a EDS / hormony, jako je Atrazin, BPA, Estradiol, Diethylstilbestrol a Nonylphenols, mohou „lignocelulózové“enzymy vylučované houbami také rozkládat celou řadu toxických látek. Kromě toho S. Commune produkuje imunostimulační polysacharidy, které jsou užitečné jako prevence a léčba rakoviny (schváleno v Japonsku pro léčbu rakoviny děložního čípku), mohou zlepšit fytoestrogenní vlastnosti některých rostlin fermentací, mohou být použity místo syřidla a laktobacilius v procesy výroby sýra a produkují enzymy rozpouštějící trombinovou sraženinu (užitečné při léčbě trombózy). Je zvláštní, že stejné „beta-glukany“, které lze extrahovat vroucí vodou jako léčbu rakoviny a imunostimulanty, používají také ropný průmysl ke zvýšení výtěžků ropy a svázání S. Commune v bizarní smyčce zpětné vazby s produkcí endokrinních disruptorů petrochemie je schopen degradovat a napravovat.

2 ~ Vyvinout protokoly DIY a DIWO (do it with others), které zjednoduší tyto receptury pro práci s EDC a fungi pro překlad kodifikovaných vědeckých znalostí do jazyka, který je přístupnější. Použijte tyto recepty pro vzdělávání, pro výslechy, pro odolnost vůči molekulárním kolonizacím a vytváření nových příběhů o multidruhových příhodách a naší kolektivní mutagenezi.

3 ~ Vyzvěte dominantní cisheteronormativní, queerphobic diskurz obklopující chemikálie narušující endokrinní systém (EDC). Abychom citovali stipendium Malin Ah-Kinga a Evy Haywardové o těchto problémech, „Mnoho zpravodajských serverů hlásí tyto děsivé endokrinní příběhy z našich dvorků. Ve snaze dát do popředí tyto problémy-jak popíšeme v následujících médiích-osvětlila Frankensteinova metamorfóza To ohrožuje sex a sexualitu. Spíše než řešení mnoha dalších zdravotních rizik spojených s expozicí toxickým látkám, stojí za debatou a kritickou reakcí ty nejsenzačnější a nejlemičtější otázky. Nabízí otázky: Proč je sex důležitější než rakovina, autoimunitní onemocnění, a dokonce smrt? Jaké kulturní nervy (z nichž mnohé jsou globalizované) jsou spuštěny? A pro ty z nás, kdo mají feministické starosti, jak přeorientujeme debatu mimo esencialismus, sexismus a heteronormativitu? (Toxická pohlaví).

Schizophyllum Commune je jedinečná „houba bílé hniloby“, protože bylo zjištěno, že má více než 28 000 genetických pohlaví. Tato adaptace, mnozí teoretizují, umožnila neuvěřitelnou genetickou rozmanitost tohoto druhu, který existuje na všech kontinentech po celém světě kromě Antarktidy. Chtěli jsme oslavit krásnou sexuální multiplicitu tohoto organismu jako jeden příklad queerness biologie. Dominantní diskurz obklopující EDC v médiích, a dokonce i od ekologických aktivistů, se silně zaměřuje na nevědecká vyprávění, že tyto molekuly způsobují určité sexuality nebo pohlaví, které naše společnost patologizuje, označuje nenormativní a často se snaží odstranit nebo se jim vyhnout. Nejen, že je sexem zpanikařené, podivné fobické zaměření veřejné pobouření o vědecky nerealistické EDC (hormony a endokrinní disruptory nedělají lidi queer nebo trans), ale ignoruje všechny zničující skutečné efekty, které můžeme spojit s EDC: obezita, poruchy štítné žlázy, některá nádorová onemocnění, mimo jiné zdravotní rizika.

Krok 1: Najděte komunitu Schizophyllum žijící ve vaší komunitě

Laboratorní sterilní kultury Schizophyllum Commune lze zakoupit za přibližně 350 $ v mikrobiologické kultivační bance, jako je ATCC … proto jsme se rozhodli pro kulturu z divokých hub zdarma:)

Měl jsem to snadné, protože jsem četl o Schizophyllum Commune a náhodou jsem si toho všiml, jak jednoho dne roste na stromě před mým bytem. Pokud nemáte to štěstí, že náhodou narazíte na S. Commune ve svém okolí, budete chtít jít do zalesněné oblasti a hledat houby „držáků“rostoucí na neduživých stromech z tvrdého dřeva (stromy, které vypadají, jako by to nedělaly) příliš dobře) nebo popadané stromy. S. Commune je jednou z nejběžnějších existujících hub na celém světě a lze ji nalézt v podstatě kdekoli, kde je možné pěstovat tvrdé dřevo.

Mushroomobserver.org poskytuje skvělý podrobný popis toho, kde a kdy pravděpodobně najdete S. Commune, a také jak jej identifikovat a jak se vyhnout „podobným vzhledům“, které by mohly vést k nesprávné identifikaci:

IDENTIFIKACE: Obec Schizophyllum lze snadno identifikovat podle rozštěpených žaber, hustých vlasů a vějířovité čepice. Čepice je široká 1–4,5 cm a obvykle má tvar skořápky nebo vějíře se šedým až bělavým povrchem. Basidiospory jsou 5–7,5 × 2. -3 mikrometry Podobná houba známá jako „Crimped Gill“Plicaturopsis crispa není tak rozšířená.

HABITAT: Obec Schizophyllum roste na tvrdém dřevě pomocí enzymů k degradaci ligninu a způsobuje „bílou hnilobu“. Nachází se tedy ve většině dřevin. Lze jej najít po celý rok díky jeho schopnosti vyschnout, v lepších podmínkách rehydratovat a poté pokračovat ve sporulaci.

Tato houba může parazitovat na stromech s malým průměrem, které jsou vystaveny stresu z jiných faktorů, jako je sucho.

PODÍVEJTE SE: Plicaturopsis crispa nebo „Crimped Gill“se podobá Split Gill. Má také plodnice ve tvaru skořápky/vějíře. Čepice je však červenohnědá nebo žlutohnědá a spodní strana je velmi výrazná. Má zvlněné žíly jako žábry, které se velmi liší od štípaných žáber Schizophyllum commune. Crimped Gill je méně obvyklý, ale výrazný, když je nalezen. “

Krok 2: Vyrobte živné agarové plotny, na kterých bude růst S. Commune

Chcete -li izolovat kulturu S. Commune, zjistíte, že budete potřebovat nějaké Petriho misky naplněné jídlem pro houby. Sladový extrakt Agar je příprava jídla pro S. Commune, neboli „živná média“, která lze připravit ze snadno dostupných přísad. Je to také dobrý zdroj potravy, který lze použít při provádění experimentů s enzymatickými testy se S. Commune a jinými houbami bílé nebo hnědé hniloby ~~ tento proces bude popsán v jiném pokynu.

BOČNÍ POZNÁMKA: Pokud jste měli potíže s nalezením S. Commune, existuje mnoho dalších hub ve stejné rodině, které lze kultivovat pomocí stejných procesů a jsou stejně dobré, ne -li lepší při degradaci znečišťujících látek narušujících endokrinní systém. Turkey Tail (Trametes Versicolor) byl nalezen v mnoha studiích, které zkoumaly stovky hub bílé a hnědé hniloby jako nejvyšší producenty „lignocelulózových“enzymů, které degradují petrochemické znečištění. Hlíva je na tom také velmi dobře.

Svou mikrobiologickou práci dělám v komunitní biologické laboratoři BUGSS (Baltimore Underground Science Space), kde mám přístup ke skleněnému zboží, digitálním váhám, odměrným válcům, autoklávu (pro sterilizaci médií teplem a tlakem) atd. Laboratoře jako tato se v posledním desetiletí objevilo po celém světě, takže možná budete chtít zkontrolovat tento seznam a zjistit, zda je nějaký ve vašem okolí. Pokud ve své oblasti nemáte velkou komunitní laboratoř, budete muset investovat do základního vybavení pro tento proces, jako například:

1 ~ Digitální váha pro přesné odměření vašich přísad

2 ~ Tlakový hrnec pro sterilizaci médií teplem a párou

3 ~ Petriho misky, lze koupit online velmi levně, opakovaně použitelné sklo nebo plast na jedno použití bude fungovat, ale opětovné použití je vždy lepší:)

4 ~ Nějaké sklo pro míchání ingrediencí, sterilizaci a skladování.

Pokud nechcete investovat do tohoto zařízení, můžete najít předem nalité agarové desky se sladovým extraktem, které si můžete koupit na webových stránkách, jako je Amazon ~ z dlouhodobého hlediska bude dražší, pokud plánujete pokračovat v mikrobiologické práci.

Existuje již mnoho skvělých průvodců a videí na YouTube, jak si vyrobit vlastní petriho misky s živnými médii doma. Takže místo toho, abych se o tom podrobně rozepisoval, propojím jen pár - a poskytnu recept na 2% sladový extrakt z agaru, což je živné médium, které budete používat.

Freshcap Musrooms: Návod, jak vyrobit agarové plotny pro pěstování hub doma

Mykoweb: Začínáme s pěstováním hub

Technický list agaru ze sladového extraktu

2% sladový extraktový agar (MEA) ~~ Recept na 1 litr:

20 g sladového extraktu (běžné zásoby piva, lze zakoupit online)

15 g agaru (ztužující činidlo - používá se k vaření často, takže jej lze zakoupit online nebo v některých obchodech s potravinami)

1 litr H20 (obvykle používám vodu z reverzní osmózy, kterou lze zakoupit ve většině obchodů s potravinami v galonových konvicích)

Tento recept lze snadno upravit, pokud chcete vyrábět menší množství. Například často vyrábím pouze 250 ml najednou, takže nakonec použiji pouze 5 gramů sladového extraktu, 3,75 gramu agaru a 250 ml vody.

Krok 3: Očkujte své Petriho jídlo houbami

Houba, kterou vidíte, se nazývá „plodnice“, je to jen malá část organismu. Většina jeho těla je ukryta ve stromě (nebo v zemi) a spotřebovává dřevo. Tato část houby se nazývá mycelium. Chcete -li kultivovat bílé vláknité, chapadlové, rhizomatické, myceliální tělo Schizophyllum Commune na Petriho misku, odeberete vzorek stonku, sterilizujete a umístíte na talíře MEA. Mycelium vyroste ze vzorku jádra sterilizovaného stonku houby a kolonizuje Petriho misku, vypadá jako bílá bavlněná podložka.

Budeš potřebovat:

• Destičky Agar (MEA) ze sladového extraktu, které jste připravili v předchozím kroku
• 70% isopropylalkohol (třecí alkohol) a rozprašovač
• Papírové ručníky
• Skalpel, nebo jen holicí strojek z nerezové oceli, bude fungovat
• kovové pinzety
• rukavice
• Plamen - pro sterilizaci nástrojů používám alkoholovou lampu, NonDisjunction má skvělý návod, jak si jej vyrobit zde.
• Sterilní povrch, na který se krájí (právě jsem na to použil sterilní Petriho misku)
• Parafilm, parafínový film používaný k utěsnění Petriho misek - můžete také použít maskovací pásku, pokud ji nemáte

STERILNÍ TECHNIKA:

Hlavní věc, kterou chcete mít při pokusu o použití sterilní techniky na paměti, je, že do vzduchu nepřetržitě padají bakterie a spory, takže chcete, aby vaše Petriho misky byly co nejvíce zakryté. Když nadzvednete víčka a nalijete médium nebo naočkujete, je vždy nejlepší držet víko těsně nad miskou, což vám umožní přístup do vnitřku vodorovně, ale víko nad nádobou ponecháte, aby se zabránilo vniknutí bakterií. Za druhé, jsou obrovský konglomerát lidských, bakteriálních, houbových a jiných organismů ~~ i když to nevidíte, obklopuje vás hustý mrak mikrobů, které difundují z vašeho těla. Spíše než jen tak sedět na povrchu kůže, váš mikrobioma se rozprostírá do vzduchu ~~ sooooooo, nikdy nemávněte rukama nad Petriho miskou, ani se nenaklánějte nad otevřenou miskou, abyste se podívali dovnitř. A noste rukavice, pokud máš je;)

ZAREGISTRUJTE SI POLOSTERILNÍ PRACOVNÍ PROSTOR

Vyberte si neporézní pracovní plochu zbavenou nečistot a harampádí. Oblast postříkejte 70% roztokem isopropylalkoholu a otřete papírovým ručníkem. Umístěte plamen do středu pracovního prostoru a zapalte ho. Budete chtít pracovat co nejblíže plameni, protože kolem něj vytvoří malé sterilní pole. Umístěte destičky MEA na jednu stranu a vzorek houby na sterilní řezací plochu na druhé straně. Obvykle používám sterilní Petriho misku jako sterilní řezací plochu a také jako opěrku nástroje. Nalijte trochu isopropylalkoholu do malé skleničky - tu použijete na sterilizaci čepele a pinzety při práci.

*¡~ INOCULUJTE ~!*

Než uděláte cokoli, sterilizujte čepel a pinzetu tak, že je ponoříte do izopropylalkoholu a poté je trochu podržíte nad plamenem. Po sterilizaci je položte na sterilní řezací plochu, pokud je položíte. Pinzetou držte houbový stonek v klidu a odřízněte jeho konec. Vezměte tento kus a ořízněte všechny strany tak, abyste skončili s malou kostkou jádra houbového stonku se všemi vnějšími povrchy odstraněnými. To pomáhá zbavit se všech ostatních mikrobů, kteří žijí na houbách, takže nekontaminují vaši kulturu. Poté ponořte jádro dříku do isopropylu asi na 30 sekund, vytáhněte ho a nechte uschnout ve sterilním poli plamene (plamen k jeho sušení nepoužívejte, hubu to zabije). Plamen znovu pinzetu sterilizujte, zatímco čekáte, až jádro stonku uschne. Potom jednoduše nadzvedněte víko jedné z vašich desek MEA tak, aby se pinzeta zasunula ze strany, a pomocí sterilizované pinzety umístěte jádro dříku do středu desky. Desku uzavřete parafilmem a během následujících týdnů byste měli vidět, jak kolonizuje misku S. Commune mycelium.

Při práci s divokými vzorky obvykle vyrábím několik talířů, takže pokud dojde ke kontaminaci, je pravděpodobnější, že budu mít alespoň jednu čistou kulturu.